نبيلة محمد علي باشا/هيئة البحوث العلمية الزراعية – قسم التقانات الحيوية
جامعة دمشق- كلية الزراعة
2015

 ملخص

هدفت الدراسة الحالية إلى تطوير طريقة فعالة للتجديد المباشر من الورقة لصنفي التفاح Golden Delicious و Royal Gala والأصلين’MM111′ و’M26’، بدءاً من أجزاء الورقة وذلك كطريقة سريعة للإكثار وكشرط أساسي لتطوير طريقة عملية وفعالة للتعديل الوراثي بوساطة بكتريا التدرن التاجي التي تحمل المورثة g2ps1 من أجل إنتاج نباتات مقاومة للأمراض الفطرية من صنفي وأصلي التفاح المدروسين. تم الحصول على تشكلات عرضية باستخدام الجزء الوسطي من الورقة من الأوراق الفتية للنباتات المكاثرة بطرائق زراعة الأنسجة النباتية وبنسب تجدد 90%,95%,92%,94% ومعدل نموات 4.0, 5.6, 4.5 4.1, للصنفين والأصلين المدروسين على التوالي وذلك على وسط موراشيج وسكوغ MS المزود بـ : MS+ B5 vitamins + 1.0 g/l MES + 2.0 mg/l TDZ+ 0.2 mg/l NAA بينما لم يلاحظ تشكل أعضاء على وسط الإكثار غير المزود بالسيتوكينينات. واعتمدت القدرة على التعضي من نسيج الورقة على عمر وأصل ومنشأ الورقة حيث تم استخدام الأوراق الفتية بلون أخضر فاتح لامع والتي تكون أكثر قدرة على التجديد من الأوراق القديمة. وقد كان الجزء الوسطي للورقة أكثر قدرةً على التجديد من الجزأين القمي والقاعدي للورقة. وقد تم تشكل النموات الجانبية العرضية من كل مناطق القطع ومن أسطح الأجزاء الورقية المجروحة. ولذلك تم استخدام الجزء الوسطي للورقي من أجل التعضي من نسيج الورقة للصنفين والأصلين المدروسين والتي تمت على وسطMS المزود بـالإضافات الآتية: MS+ B5 vit. + 1.0 g/l MES+ 30 g/l sucrose+ 1 mg/l BAP+ 0.3 mg/l IBA+ 0.2 mg/l GA3 + 6 g/l agar وتمت عمليات إعادة الزراعة كل أربعة أسابيع لتوفير كميات كبيرة من الأوراق الضرورية للتعديل الوراثي. تمت دراسة العوامل المؤثرة على التعديل الوراثي وأمثلتها باستخدام بكتريا التدرن التاجي المحتوية مورثة g2ps1 من نبات الجربيرا والتي تشفر للبيرون سينثيز الذي يساهم في زيادة المقاومة للأمراض الفطرية والحشرات. تم تجديد نموات خضرية معدلة وراثياً على وسط موراشيج وسكوغ الحاوي 5مغ/ل BAP أو 2 مغ/ل ثيوديزيرون TDZ و0.2 مغ/ل NAA بوجود العامل الانتخابي PPT بتركيز3 مغ /ل. وتم إكثار النموات المعدلة وراثياً على وسط موراشيج وسكوغ الحاوي: MS + B5 vitamins + 1.0 mg l-1 BAP + 0.3 mg l-1 IBA, 0.2 mg l-1 GA3+1.0 g/l MES+ 30 g/l sucrose + 7.0 g/l Agar وذلك بوجود العامل الانتخابي PPT بتركيز 3 مغ /ل وتم إعادة إكثارها كل أربعة أسابيع للحصول على كميات كافية لزوم اختبارات إثبات التعديل الوراثي. تم الحصول على كلونات معدلة وراثياً من الصنفين والأصلين المدروسين على التوالي والتي تم إثبات تعديلها الوراثي بنموها على الوسط الانتخابي وأيضاً بعزل دنا من المتجددات المفترضة معدلة وراثياً ثم تم إجراء اختبار التفاعل التسلسلي للبوليمراز باستخدام بادئات خاصة للكشف عن المورثة المنقولة (بحجم 1244 زوج قاعدي) ومورثة الانتخاب ( بحجم 477 زوج قاعدي) والتي أثبتت وجود المورثة المنقولة في الأجزاء المعدلة وراثياً، وكانت نسبة التعديل الوراثي 0.4 و 0.6 و0.1 و 0.3 % على التوالي ، وكذلك من خلال نتائج تحليل التتابع النكليوتيدي لسلاسل الـ دنا المعزول من النباتات المعدلة وراثياً ومقارنته مع تسلسل المورثةg2ps1 من الجربيرا
Gerbera hybrida mRNA for 2-pyrone synthase (accession no. Z38097.2 ، وبنسبة تشابه تراوحت بين 97 و99%. تم بعد ذلك تجذير النباتات المعدلة وراثياً مخبرياً ضمن الأنابيب بنقل الأجزاء النباتية بطول 3-2 سم إلى وسط التجذير ½ MS والمزود بـ1.0 mg/l إندول بيوتريك أسيد (IBA) بوجود العامل الانتخابي وتمت أقلمة النباتات المجذرة بسهولة ونجاح في البيت الزجاجي، ثم تركت لتنمو في ظروف البيت الزجاجي حسب قانون الأمان الحيوي في سورية لعام 2012 ليتم تقييم أدائها في مقاومة الأمراض الفطرية.